07 Mar Estado actual y perspectivas en la investigación con células madre
Estado actual y perspectivas en la investigación con
células madre
Excma. Sra. Dª Josefina Mª Illera del Portal
Académica de Número
31de mayo de 2010
A finales del siglo XX empezó una nueva etapa en la investigación y fue el descubrimiento de unas células embrionarias que eran capaces de formar células adultas y diferenciadas,
(Reinolds y Weiss, 1992), (Richards y col., 1992) y (Eglitis y col., 1997)
. Del descubrimiento de estas células madre nace una nueva especialidad médica que es la Medicina regenerativa.
Las células madre tienen unas características que no se encuentran en las células diferenciadas. Son capaces de dividirse y hacer copias de sí mismas (Regeneración celular). Sin embargo, este eterno poder de división no se limita solo a la creación de más células madre, sino que además son capaces de producir una amplia variedad de células adultas in vivo e in vitro. Estas características hacen a las células madre imprescindibles tanto para sustituir a las células del cuerpo dañadas o envejecidas como para la formación de nuevas células necesarias en el organismo.
(
I.L. Weissman, 2002)
Existen varios tipos de células madre, pueden clasificar atendiendo a su potencial, totipotentes, pluripotentes, multipotentes o unipotentes (Jaenish y Young 2008). Atendiendo a su origen pueden ser:
1.- Células madre de origen embrionario:
v
Totipotentes, (del latín totus que significa todos). Estas células totipotentes nos las encontramos en los primeros estadios del desarrollo embrionario. Desde dos células hasta el estadio de mórula. Si se separan las células o blastómeros que constituyen el embrión, cada una de ellas es capaz de regenerar, el embrión completo.
v
Pluripotentes, (del latín plures varios) son aquellas que pueden formar distintos tipos de células especializadas. No pueden formar un embrión completo pero si cualquier otro tipo de célula. Si a un embrión en estadio de blastocisto le extraemos las células del nódulo embrionario o masa celular interna y las ponemos a cultivar, estas células darán lugar a la formación: del ectodermo, mesodermo y endodermo, que son las tres capas embrionarias del linaje germinal y por lo tanto de ahí se formaran todos los tejidos y órganos que constituyen el feto.
2.- Células madre adultas o somáticas:
v
Multipotenciales, son células especializadas, aquellas que solo pueden generar células misma capa o linaje embrionario (por ejemplo: una célula madre mesenquimal de médula ósea, al ser de origen mesodérmico, dará origen a células de esa capa como miocitos, adipocitos, osteocitos etc).
v
Unipotentes, son aún más especializadas y solo pueden formar un único tipo de células, como por ejemplo las células germinales que solo pueden formar espermatogonias, para que se formen espermatozoides.
Según avanza el desarrollo embrionario las células que lo componen se van diferenciando gradualmente: de unas células madre que tienen una potencialidad total y que están completamente indiferenciadas pasando por unas células madre con una potencialidad parcial, cada vez más reducida y que únicamente pueden originar un número limitado de tipos celulares, hasta células completamente diferenciadas, especializadas para una función concreta y que no son capaces de originar ningún otro tipo celular.
En el organismo existen muchas células especializadas y otras que forman parte del sistema de renovación celular, como por ejemplo las células sanguíneas o las células de la piel, que tienen que renovarse continuamente. En estos tejidos hay dos tipos de células: unas diferenciadas que viven generalmente solo días, y otras que son células madre que se dividen para originar, en cada división dos células: una de ellas se diferencia en la célula típica del tejido originario para reemplazar a la célula muerta y otra que permanece indiferenciada, conservando su carácter de célula madre para mantener la renovación celular. También hay tejidos que están formados por células permanentes, cuya pérdida es irremplazable. Como ocurre en el sistema nervioso, corazón, tiroides, hígado. Estos órganos poseen células bien diferenciadas y muy especializadas, generalmente incapaces de dividirse y, en ningún caso capaces de formar otro tipo celular diferente. Pero gracias a la investigación se ha llegado a demostrar que cuando se dañan algunos de estos tejidos, constituidos por células permanentes incapaces de dividirse, su regeneración puede inducirse a partir de células madre quiescentes
(Hahn and Weinberg, 2002; Hanahan and Weinberg, 2000; Malumbres and Barbacid, 2001). Se les llama quiescentes porque son células que se encuentran en la fase de reposo dentro del ciclo celular. H
abitualmente inactivas, pero que pueden activarse ante determinados estímulos, dividirse y dar lugar a células hijas que se diferencian para reemplazar las perdidas. Por ejemplo: en el músculo esquelético sus células no se dividen pero pueden regenerarse a partir de mioblastos. Siempre se ha creído que las neuronas que se destruían nunca podían regenerarse, pero gracias a estas células madre quiescentes y en determinadas circunstancias se pueden regenerar. Estas células madre quiescentes son órgano específicas, con una potencialidad parcial muy limitada. La destrucción del tejido cardiaco en el infarto, o de tejido nervioso en el infarto cerebral, o la destrucción progresiva de ambos tejidos en enfermedades degenerativas o simplemente por el envejecimiento, no son procesos reparables por los mecanismo naturales
Fuentes de células madre.
Embriones: las células madre pueden provenir de embriones extra que han sido almacenados en clínicas de fertilidad.
Embriones de FIV: son embriones creados con el propósito específico de obtener células madre.
Clonación de embriones: son embriones clonados por medio de transferencia nuclear de células somáticas, SNT, con el fin de recoger sus células madre.
Fetos abortados: los fetos abortados contienen células madre, las cuales pueden ser cultivar para obtener células madre.
Cordones umbilicales: este tejido post-parto posee potencial para la investigación.
Tejidos u órganos adultos: se pueden obtener células madre de tejidos u órganos durante cirugía.
Cadáveres: el aislamiento y supervivencia de células progenitoras neurales de tejidos post-mortem (hasta 20 horas después de la muerte), (Delmonico y col.
2002).
,
Embriones FIV
Son creados con el único propósito de obtener células madre. En animales, se procede a la obtención oocitos preovulatorios o post ovulatorios y son fecundados en el laboratorio con semen capacitado in vitro. Después serán inseminados in vitro y posteriormente serán cultivados in vitro hasta que alcancen el estadio de blastocisto. Una vez alcanzado este estadio se le extraerán las células del nódulo embrionario para su cultivo posterior de células madre de tejido embrionario. Este método de obtener células madre plantea muchos problemas éticos, porque cuando se extraen las células del nódulo embrionario se destruye el embrión. La legislación española permite el uso de embriones humanos para investigación desde el año 2006 (Ley 14/2006, de 26 de mayo sobre técnicas de reproducción humana asistida).
Clonación de embriones
Para la clonación de embriones como demostró Campbell y col. en 1996, necesitamos un oocito maduro nuclearmente en estadio de metafase II, al que se le extraerá el núcleo, para tener un oocito enucleado. Por otro lado necesitamos el núcleo de una célula donante, que puede ser de origen embrionario, fetal o adulta. Para ello se realizan cultivos de células en el laboratorio y de estos cultivos se extraerán núcleos que serán los que aporten el ADN al nuevo individuo que se va a formar. Los núcleos extraídos son reinsertados en los oocitos previamente enucleados. Después se somete al nuevo ser formado a la reprogramación celular, que es, una descarga eléctrica durante un tiempo determinado msg y con una intensidad determinada mV y a continuación se inicia el cultivo in vitro de los embriones así formados. A las 24 h de la reprogramación nuclear el embrión empieza a dividirse y así se formarán el embrión en 2, 4, 8 células, mórula, la mórula compacta y a partir de aquí se empieza a formar un hueco en el embrión que es el inicio de la formación del blastocele. Las células se empiezan a separar y a la vez a especializarse, unas células se colocaran debajo de la zona pelúcida y son las células que van a dar lugar a la formación del trofoblasto o trofoectodermo y son las células que van a dar lugar a la formación de la placenta y el resto de células que quedan delimitadas por el blastocele, formando un acúmulo de células que son, las células del nódulo embrionario o la masa celular interna del blastocisto y a partir de ellas se originaran las 3 láminas germinativas del embrión: ectodermo, mesodermo, y endodermo que dan lugar a la formación de todos los órganos y tejidos del organismo. Una vez el clon ha alcanzado el estadio de blastocisto se procede a la extracción de las células del nódulo embrionario y estas se ponen en cultivo y de ellas como son ya células pluripotenciales obtendremos células de tejido nervioso, cardiaco, intestinales, de la piel etc. (
Beyhan
Z
y col. 2007)
La clonación de embriones humanos está prohibida prácticamente en todo el mundo, por ello, ha llevado a los investigadores a descubrir otros campos de investigación, para que en un futuro se puedan aplicar en medicina regenerativa.
En los ensayos clínicos realizados en humana empleando células madre de origen embrionario creando clones con células afectadas de pacientes (clonación terapéutica) no han demostrado ofrecer buenos resultados, debido a la ineficiencia del proceso de la clonación, la falta de conocimientos de los mecanismos que regulan estos procesos y la necesidad de mantener la terapia inmunosupresiva durante toda la vida del paciente, además del riesgo de inducir el desarrollo de teratomas además de la dificultades éticas que su uso conlleva. (Holden, C. y G. Vogel 2008a y Holden, C. y G. Vogel 2008b)
En el año 2007 (
Prentice y G Tarne) afirman que hay 1238 procedimientos aprobados por la FDA, de ellos más de 250 para tratar el infarto agudo de miocardio. Se observa una ligera mejoría de la fracción de eyección ventricular izquierda cuando se inyectan células madre embrionarias. No se producen efectos secundarios negativos, (Burt, R. K. et al. 2008). En ensayos clínicos para la distrofia muscular (Darabi, R. et al 2008) las células madre embrionarias, no se distribuyen uniformemente por todos los músculos afectados. Se han descrito reacciones inmunológicas adversas. Se ha constatado la muerte rápida de las células inyectadas (Tedesco et al 2010).
Células iPS
En el año 2007 dos investigadores al mismo tiempo pero en dos laboratorios muy distantes en el mundo, uno en Japón y otro en USA,
Shinya Yamanaka (Takahashi y Yamanaca en 2006 y Takahashi y col. 2007) y el equipo de James Thomson (Yu et al 2007), llegaron al mismo descubrimiento, la formación de células pluripotentes inducidas por ingeniería genética, o células iPS.
Este logro lo consiguieron mediante la introducción de 4 genes de transcripción (Oct3/4, Sox2, Klf4, y c-Myc) en células epiteliales. Para inyectar dentro de la célula los genes de transcripción empleo un retrovirus. La pluripontencia de las células está controlada por 3 proteínas Oct3/4, Nanog, and Sox2. Son factores de transcripción que tienen los genes para unirse al ADN. Y así de esta manera consiguieron que células epiteliales adultas, se transformaran en células de tejido nervioso, cardiaco, grasa etc. Es decir habían conseguido que una célula adulta se transformara en una célula madre adulta pluripotencial.
Por otro lado se ha conseguido obtener células pluripotenciales inducidas utilizando un virus que no llega a integrarse en el genoma de las células.
Inconvenientes que tienen las células iPS son:
·
Riesgo de transmisión de enfermedades virales.
·
Presencia de Teratomas, causados por la introducción de alguno de los genes de reprogramación celular
·
Posibles problemas génicos debido a la introducción del ADN de los genes reprogramadores en las células receptoras.
El mismo grupo de Yamanaka, en poco tiempo, consigue reprogramar hepatocitos y células de epitelio de mucosa gástrica sin utilizar el c-Myc, (Okita et al, 2007). Demostrándolo en células iPS humanas así como en ratones, sin que se generaran tumores. Otros investigadores del grupo de Yamanaka, (
Nakagawa et al 2008),
han estudiado más profundamente los genes reprogramadores llegando a la conclusión de que OcT3/4 es necesario para que se diferencien las células iPS, y los genes c-Myc y el Klf4 son inductores de la formación de teratomas. (
Jaenish R y R Young ,2008).
Murry ChE y Keller G, (2008) afirman que las células iPS generadas muestran expresión génica y modelos de metilación muy parecidos a los de las células madre embrionarias, crecen internamente mientras expresan telomerasa, tienen un cariotipo normal. Biológicamente no hay diferencias entre las células iPS y las embrionarias humanas (Leeb et al, 2010).
También se han
obtenido células pluripotenciales inducidas (iPS) utilizando virus que no llegan a integrarse en el genoma de las células. (Woltjen y col 2009)
Ventajas que ofrecen las células iPS:
1.- No inducen rechazo inmunológico, abriéndose la posibilidad de crear fármacos específicos para un paciente determinado.
2.- No se necesita utilizar oocitos, ni embriones ni clones para la obtención de células madre.
3.- La técnica es más sencilla
4.- Coste reducido.
Por lo tanto el empleo de células madre pluripotentes inducidas pueden ser el más práctico y eficiente camino para producir grandes bancos de células humanas pluripotentes (MF Pera y K Hasegawa, 2008). Evitándose así la destrucción de miles de embriones.
Sin destruir embriones y sin utilizar óvulos, se están logrando líneas celulares iPS de pacientes con ELA (Dimos et al 2008),
con síndrome de Shwahman-Bodian- Diamond, distrofia muscular de Duchenne,
enfermedad de Huntington,
diabetes mellitus tipo 1, síndrome de Down y síndrome de Lesch-Nyhan (Park et al 2008).
En 2008, en el instituto de medicina regenerativa de la Universidad de Harvard, el grupo del Dr. Melton, representado por Zhou et al consiguen reprogramar células pancreáticas directamente en células beta exocrinas y productoras de insulina, usando reprogramadores específicos del desarrollo de células pancreáticas en ratones utilizando 3 reprogramadores:
Ngn3
(conocido como Neurog3), Pdx1 y Mafa.
También se han conseguido células iPS de pacientes con atrofia muscular espinal (Ebert A, et al. 2009). Con Parkinson y sin la utilización de genes reprogramadores (Soldner F, et al. 2009). Células iPS de pacientes con Diabetes tipo I, (Maer et al. 2009) para estudiar la enfermedad y hacer pruebas in vitro de nuevos fármacos
(Blow, 2008 y Holden and Vogel, 2008b). Kim et al 2009, consiguen reprogramar células adultas neurales a neuronas dopaminérgicas y estas, cuando son inyectadas en cerebros de ratas con Parkinson, consiguen una mejoría en los síntomas clínicos.
Las células iPS pueden ser el más práctico y eficiente camino para producir grandes bancos de células humanas pluripotentes.
Esto evitaría el uso y destrucción de
miles de embriones, (
MF Pera y K Hasegawa, 2008)
Una alternativa al uso de los vectores virales para la reprogramación celular sería la propuesta presentada por una empresa,
Prime Gen, conjuntamente con Unidyn, fabricante de nanotubos (cilindros de moléculas de carbono de pocos nanómetros de diámetro) sustituir los vectores virales por nanotubos de carbono, tras demostrar que con ellos se pueden introducir proteínas complejas (hasta una docena) en células testiculares y de retina, (D Cyranoski y M Baker, 2008).
Actualmente se está trabajando con cultivos de líneas celulares iPS (Prentice y Tarne, 2007) para: producir células hematopoyéticas contra la anemia falciforme. (Hanna J et al, 2007). Cardiocitos, para reparar el daño que se produce en el infarto agudo de miocardio, (Nelson y col. 2009 y Pfannkuche y col. 2009). Cultivos de células que producen el factor VIII para tratar la hemofilia. (
Xu D, y col. 2009).
Asi mismo para poder profundizar más en el conocimiento de ciertas enfermedades que actualmente no tienen cura y poder investigar nuevos fármacos que pudieran tratarlas, se están estudiando, c
élulas iPS de pacientes con ELA, (Dimos J, y col. 2008). Células iPS de pacientes con síndrome: Shwahman-Bodian- Diamond, distrofia muscular de Duchenne, enfermedad
de Parkinson, enfermedad de Huntington,
diabetes mellitus tipo 1, síndrome de Down y síndrome de Lesch-Nyhan, (Park I H, y col. 2008). Células iPS de pacientes con atrofia espinal muscular, (Ebert A, 2009). Células iPS en pacientes con Parkinson y sin genes reprogramadores, (Soldner F, y col. 2009).
Células iPS de pacientes con diabetes tipo I, (Maehr R, y col. 2009).
En general los inconvenientes que presentan las células iPS son:
Posibilidad de transmisión de enfermedades virales
Posibilidad, aunque menor, de producir tumores
Posibles problemas génicos debido a la introducción del ADN de los genes reprogramadores en las células receptoras.
En Abril de 2009, Zhou y col, proponen en fibroblastos de ratones, el empleo de células iPS utilizando proteínas recombinantes por lo tanto el nacimiento de las células piPS.
Las nuevas células piPS, sustituyen el material genético por material proteico. Así se elimina el riesgo de modificar el genoma. La transducción de proteínas es un método más simple y rápido de realizar. Probablemente este sea el método más óptimo para inducir la reprogramación celular y conseguir células madre de pacientes afectados de distintas enfermedades para poder conocer mejor el desarrollo de ciertas enfermedades y su posible tratamiento.
Bibliografía
:
Beyhan Z
,
Lager AE
,
Cibelli JB
.
(2007).
Interspecies nuclear transfer: implications for embryonic stem cell biology.
Cell Stem Cell.
1(5):502-12.
Blow N. (2008). Stem cells: in search of common ground. Nature. 451:855-8.
Burt RK,
N. Beohar, WG. Barr, R. Craig, y Wen, JA Rapp, J Kessler.
(2008).
Clinical Applications of Blood-Derived and Marrow-Derived Stem Cells for Nonmalignant Diseases.
JAMA; 299, 925-936.
Campbell, KH, McWhir J,
Ritchie
WA
, Wilmut,
I.
(1996). Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line. Nature 380,
64–66.
Cánepa E. T. (2007). Proliferación o quiescencia: una difícil decisión celular.
Química Viva. 6,
17-27.
Cyranoski D, M Baker. (2008).
Stem-cell claim gets cold reception.
Nature 452:132-136.
Darabi R, Santos FN, Perlingeiro RC.
(2008).
The therapeutic potential of embryonic and adult stem cells for skeletal muscle regeneration.
Stem Cell Rev. Sep;4(3):217-25.
Delmonico
FL
,
Arnold
R
,
Scheper
-Hughes N
,
Siminoff
LA
,
Kahn
J
,
Youngner
SJ
. (2002). Ethical incentives–not payment–for organ donation. N Engl J Med. 346(25):2002-5.
Dimos JT,
Rodolfa, K.T., Niakan, K.K., LM. Weisenthal, H Mitsumoto, W Chung, G F. Croft, G Saphier, R Leibel, R Goland, H Wichterle, CE Henderson, K Eggan. (2008).
Induced Pluripotent Stem Cells Generated from Patients with ALS Can Be Differentiated into Motor Neurons.
Science
29 August: 321. 5893, 1218 – 1221.
Ebert AD, J Yu, FF Rose V B. Mattis, C L. Lorson, J A. Thomson, C N. Svendsen. (2009). Induced pluripotent stem cells from a spinal muscular atrophy patient. Nature 457(7227), 277-280.
Hanna J
,
Wernig M
,
Markoulaki S
,
Sun CW
,
Meissner A
,
Cassady JP
,
Beard C
,
Brambrink T
,
Wu LC
,
Townes TM
,
Jaenisch R
. (2007). Treatment of sickle cell anemia mouse model with iPS cells generated from autologous skin.
Science.
21;18(5858):1920-3.
Hahn, W. C., and Weinberg, R. A. (2002). Modelling the molecular circuitry of cancer. Nat Rev Cancer 2, 331-41.
Hanahan, D., and Weinberg, R. A. (2000). The hallmarks of cancer. Cell. 100, 57-70.
Holden C, G Vogel. (2008).
Cell biology. Nuclear transfer: still on the table.
Science 319 (5863), 563.
Holden C, Vogel G. (2008). A Seismic Shift for StemCell Research. Science 319:561-3.
Hyun I,
Hochedlinger, K., Jaenisch, R., Yamanaka, S.
(
2007).
New Advances in iPS Cell Research Do Not Obviate the Need for Human Embryonic Stem Cells. Cell Stem Cell:
1(4
), 367-368.
Jaenish R and R Young. (2008).
Stem Cells, the Molecular Circuitry of Pluripotency and Nuclear Reprogramming. Cell 132(4), 567-582.
Kim JB, Sebastiano V, Sebastiano V, Wu G, Araúzo-Bravo MJ, Sasse P, Gentile L, Ko K, Ruau D, Ehrich M, van den Boom D, Meyer J, Hübner K, Bernemann C, Ortmeier C, Zenke M, Fleischmann BK, Zaehres H, Schöler HR. (2009). Oct4-induced pluripotency in adult neural stem cells. Cell. 6; 136(3):411-9 Leeb C, M Jurga, C McGuckin, R Moriggl, L Kenner. (2010). Promising new sources for pluripotent stem cells. Stem cell Rev. and Rep 6: 15-26.
Maer R ,
S Chen
,
M Snitow
,
T Ludwig
,
L Yagasaki
,
R Goland
,
R L. Leibel
,
D A. Melton
. (2009). Generation of pluripotent stem cells from patients with type 1 diabetes. PNAS:
106 (
37),
15768-15773.
Malumbres, M., and Barbacid, M. (2001). To cycle or not to cycle: a critical decision in cancer. Nat Rev Cancer 1, 222-31.
Murry Ch.E, Keller G. (2008). Differentiation of Embryonic Stem Cells to Clinically Relevant Populations: Lessons from Embryonic Development. Cell 132, 661-680
Nakagawa
M, M Koyanagi, K Tanabe, K Takahashi, T Ichisaka, T Aoi, K Okita, Y Mochiduki,
N Takizawa
and
S Yamanaka
. (2008).
Generation of induced pluripotent stem cells without Myc from mouse and human fibroblasts.
Nature Biotechnology 26; 101-106.
Nelson TJ, A Martinez-Fernandez,
S Yamada
, C Perez-Terzic, Y Ikeda, A Terzic. (2009).
Repair of Acute Myocardial Infarction by Human Stemness Factors Induced Pluripotent Stem Cells.
Circulation 120; 408-416.
Okita K, Ichisaka T, Yamanaka, S
. (2007). Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells. Nature: 448, 313–317.
Park IK
,
N Arora
, H Huo,
N Maherali
,T Ahfeldt, A Shimamura, M. W Lensch, C Cowan, K Hochedlinger and G Q. Daley
. (2008). Disease-Specific Induced Pluripotent Stem Cells. Cell 134(5): 877-886.
Pera MF
,
Hasegawa K
. (2008). Simpler and safer cell reprogramming.
Nat Biotechnol.
26(1):59-60.
Pfannkuche K
,
Liang H
,
Hannes T
,
Xi J
,
Fatima A
,
Nguemo F
,
Matzkies M
,
Wernig M
,
Jaenisch R
,
Pillekamp F
,
Halbach M
,
Schunkert H
,
Sari? T
,
Hescheler J
,
Reppel M
.
(2009).
Cardiac myocytes derived from murine reprogrammed fibroblasts: intact hormonal regulation, cardiac ion channel expression and development of contractility.
Cell Physiol Biochem.
; 24(1-2):73-86.
Prentice DA
,
Tarne G
. (2007). Treating diseases with adult stem cells.
Science.
19;315(5810):328.
Reynolds BA, Weiss S. (1992). Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. Mar 27;255(5052):1707–1710.
Richards LJ
,
Kilpatrick TJ
,
Bartlett PF
. (1992). De novo generation of neuronal cells from the adult mouse brain.
Proc Natl Acad Sci U S A.
89(18):8591-5.
Soldner F,
Hockemeyer, D, Beard C, Gao Q, Bell G.W, Cook EG, Hargus G, Blak A, Cooper O, Mitalipova M, Isacson O, Jaenisch R.
(2009).
Parkinson’s Disease Patient-Derived Induced Pluripotent Stem Cells Free of Viral Reprogramming Factors.
Cell,
136, 5
, 964-977.
Takahashi T and
S Yamanaka
. (2006). Induction of pluripotent Stem Cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell 126 (4), 663-676.
Takahashi K, K Tanabe, M Ohnuki, M Narita, T Ichisaka, K Tomoda ,
S Yamanaka
. (2007) Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell, 131(5): 861-872.
Tedesco FS, A Dellavalle, J Diaz-Manera, G
Messina
, and G Cossu. (2010). Repairing skeletal muscle: regenerative potential of skeletal muscle stem cells. J. Clin. Invest.
120
(1): 11-19.
Xu D,
Z Alipio
,
LM Fink
,
DM Adcock
,
J Yang
,
DC Ward
,
Y Ma
.
(2009).
Phenotypic correction of murine hemophilia A using an iPS cell-based therapy.
PNAS 106(3), 808-813
Yu J
, MA
Vodyanik
, K
Smuga-Otto
, J
Antosiewicz-Bourget
, JL
Frane
, S
Tian
, J
Nie
, GA
Jonsdottir
, V
Ruotti
, R
Stewart
, II
Slukvin
, JA
Thomson
.
(2007). Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.
Science.
318(5858):1917-20.
Weissman
IL
. (2002).
Stem cells–scientific, medical, and political issues.
N Engl J Med
. 16; 346(20):1576-9.
Werning M,
Zhao JP, Pruszak J, Hedlund E, Fu D, Soldner F, Broccoli V, Constantine-Paton M, Isacson O, Jaenisch, R. (2008).
Neurons derived from reprogrammed fibroblasts functionally integrate into the fetal brain and improve symptoms of rats with Parkinson’s disease.
PNAS 105; 5856-5861.
Woltjen K, IP Michael, P Mohseni, R Desai, M Mileikovsky, R Hämäläinen, R Cowling, W Wang, P Liu, M Gertsenstein, K Kaji, HK Sung, A Nagy. (2009).
piggyBac
transposition reprograms fibroblasts to induced pluripotent stem cells.
Nature
458
, 766-770
Zhou H,
S Wu
,
J Young Joo,
S Zhu
,
D Wook Han,
T Lin,
S Trauger
, G Bien,
S Yao
,
Y Zhu,
G Siuzdak,
HR. Schoeler,
L Duan,
and S Ding
. (2009)”.Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using Recombinant Proteins.
Cell Stem Cell
, 4, 381–384.
Zhou Q, J Brown, A Kanarek, J Rajagopa and D Melton. (2008).
In vivo
reprogramming
of adult pancreatic exocrine cells to
β
-cells
.
Nature
455
, 627-632.
