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EL SULFATO DE ESTRONA Y SU UTILIZACIÓN PARA EL

DIAGNÓSTICO DE LA FUNCIÓN REPRODUCTORA EN

ESPECIES DE INTERÉS VETERINARIO.

Gema Silván Granado y Juan Carlos Illera del Portal

Departamento de Fisiología (Fisiología Animal). Facultad de Veterinaria. UCM

El presente trabajo es el resultado de, aproximadamente, 10 años de trabajo en el Laboratorio de Endocrinología del Departamento de Fisiología Animal de la Facultad de Veterinaria de Madrid. Todos los datos que vamos a presentar son originales y forman parte de varias publicaciones y Tesis Doctorales.

La primera pregunta que surge es, por qué un laboratorio de Endocrinología centra sus esfuerzos en desarrollar y validar una técnica de diagnóstico hormonal, para una hormona determinada, en nuestro caso, el sulfato de estrona. Pues bien, podemos considerar que ésta es una hormona ?multifuncional? cuya determinación puede ser aplicada en machos y hembras de distintas especies de interés veterinario, para el diagnóstico de distintas fases de la función reproductora.

En las hembras, nos vamos a centrar en el periodo de la gestación y los diagnósticos que es posible realizar, basados en la determinación de las concentraciones de sulfato de estrona en el plasma materno, son los siguientes:

1º.-      Gestación.

2º.-      Supervivencia fetal.

3º.-      Diagnóstico combinado de gestación y supervivencia fetal.

4º.-      Determinación del número de fetos que está gestando la hembra.

5º.-      Diagnóstico del sexo fetal.

En el macho hemos utilizado la determinación plasmática de sulfato de estrona para el diagnóstico de criptorquidia y castración en la especie equina.

A la vista de los diagnósticos planteados, la siguiente pregunta que surge es: ¿cuál es el origen de esta hormona que permite establecer los mencionados diagnósticos?.

La respuesta es muy sencilla, se ha demostrado que, en las hembras gestantes de la  mayoría de las especies de interés veterinario, la presencia de una unidad feto-placentaria viable está acompañada del incremento de las concentraciones de sulfato de estrona en la sangre de la madre. Por tanto, en la síntesis de esta hormona estarán implicadas estructuras tanto maternas como fetales.

En la síntesis del sulfato de estrona están implicados los siguientes órganos:

a.-        Hígado materno y fetal: de estas estructuras proviene el sustrato para la síntesis de la hormona que es el colesterol.

b.-        Adrenales fetales: sintetizan DHEA (dehidroepiandrosterona) uno de los precursores del sulfato de estrona.

c.-        Gónadas fetales: sintetizan grandes cantidades de estradiol 17-ß (E2) y en menor cuantía estrona (E1).

d.-        Unidad feto-placentaria: en ella se producen las etapas finales de la síntesis del sulfato de estrona, con el paso de DHEA ó E2 a E1 y la posterior sulfatación de E1.

La primera parte de la síntesis es el paso de colesterol a androstenediona, esta síntesis tiene lugar, bien en las adrenales fetales con la producción de DHEA que pasará posteriormente a androstenediona en la unidad fetoplacentaria, bien en las gónadas fetales. Existen dos vías de síntesis - delta 4 y delta 5 ? cuya utilización dependerá de la especie animal o de la disponibilidad de las enzimas esteroidogénicas.

El esquema de estas vías de síntesis es el siguiente:

La síntesis de sulfato de estrona finaliza en la unidad feto-placentaria. En esta estructura existe una enzima específica, la sulfotransferasa, encargada de sulfatar en el C3 la Estrona, transformándola en sulfato de estrona.

En los machos de la especie equina, la síntesis de esta hormona tiene lugar en las células testiculares de Leydig. Se ha demostrado que en este tipo celular testicular también existe la enzima sulfotransferasa.

Técnicas de Diagnóstico Hormonal: determinación de sulfato de estrona por enzimoinmunanálisis (EIA).

La cuantificación de una hormona en un fluido biológico, como el plasma, requiere una técnica de determinación específica con unas determinadas características que la hagan idónea para este fin.

Existe una amplia variedad de técnicas de diagnóstico hormonal que reúnen estas características, de entre todas ellas hemos elegido el enzimoinmunoanálisis (EIA o ELISA) por presentar unas propiedades que la hacen idónea para nuestros propósitos. El Laboratorio de Endocrinología del Departamento de Fisiología (Fisiología Animal) de la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid, ha desarrollado y validado desde el año 1987, técnicas EIA para distintas hormonas esteroides y proteicas, entre las que se encuentra la técnica para la determinación de sulfato de estrona.

El principio sobre el que están basadas las técnicas EIA, es una reacción antígeno-anticuerpo, más concretamente, la reacción irreversible entre pequeñas porciones de dos reactivos, las hormonas que, en el caso de las hormonas esteroides a cuyo grupo pertenece el sulfato de estrona, actúan como haptenos y los lugares de unión de los anticuerpos, formándose un complejo antígeno-anticuerpo. En el ensayo, una cantidad fija y limitada de anticuerpo específico que ha sido fijado (adsorbido) a una fase sólida (pocillos de una microplaca de titulación), se hace reaccionar con la correspondiente hormona que, o bien se ha unido a una sustancia marcadora (enzima) o está sin marcar, contenida en la muestra problema o añadida en cantidades conocidas (estándares), de tal manera que la hormona sin marcar (problema o estándar) y la hormona marcada (conjugado), compiten por unirse a los lugares de unión de las moléculas de anticuerpo. Si las concentraciones de la hormona problema son extremadamente bajas, con el fin de amplificar la señal, no se realiza la reacción de competición, sino lo que se denomina ?una amplificación? que consiste en favorecer la unión de la hormona sin marcar al anticuerpo, para lo que primero se añade ésta, se incuba un determinado tiempo, al cabo del cual se supone que se habrá unido toda la hormona sin marcar al anticuerpo, añadiéndose posteriormente el conjugado que se unirá a aquellos lugares de unión del anticuerpo que no hayan sido cubiertos por la hormona sin marcar.

En ambos casos (competición y amplificación),  después de un período de incubación se realiza la separación de las fracciones libre y unida al anticuerpo (separación bound/free) y la cantidad de hormona marcada se mide en la fracción unida al anticuerpo. Por tanto, podemos decir que la concentración de los lugares de unión del anticuerpo disponible, para que se una la hormona marcada, está inversamente relacionada con la concentración de la hormona sin marcar, que exista en la muestra.

Técnicas EIA para la determinación cuantitativa de sulfato de estrona.

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