Descripcion

?DESARROLLO DE UNA VACUNA RECOMBINANTE PARA LA PROTECCIÓN DEL CONEJO DE MONTE FRENTE A LA MIXOMATOSIS Y ENFERMEDAD VÍRICA HEMORRÁGICA?

Dr. D. J.M. Sánchez-Vizcaíno

21 de febrero de 2001

I. Introducción

El conejo de monte juega un papel ecológico de primer orden en los ecosistemas mediterráneos ibéricos. Se han contabilizado más de 40 depredadores habituales del conejo (Delibes e Hiraldo, 1981). Entre ellos destacan el ceéo (Lynx pardina) y el ágapel (Aquila adalberti), ambos endémicos de la península Ibérica y en grave riesgo de extinción. El lince ibérico es considerado el felino más amenazado del mundo por la Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza (UICN). En los últimos años la Unión Europea ha destinado más de 500 millones de pesetas en proyectos de conservación del lince a través de fondos Life. Los estudios encaminados a identificar los problemas de conservación de la especie coinciden en señalar la reducción de las poblaciones de conejos, debida a los efectos de la mixomatosis y la RHD, como una de las principales amenazas (Delibes y cols. 1998). Desde la irrupción de la mixomatosis en España en 1953 el número de linces ha descendido en un 80% y su área de distribución ha quedado reducida a un 2% del territorio peninsular. El problema se intenta paliar mediante repoblaciones de conejos en zonas linceras, pero en ocasiones las repoblaciones incontroladas son la causa de introducción de enfermedades (Villafuerte y cols. 1995). Por su parte el águila imperial, de la que apenas quedan unos 300 ejemplares de acuerdo a los últimos censos, también basa su alimentación fundamentalmente en el conejo. Otras rapaces afectadas son el águila real, el águila perdicera el búho real y el buitre negro. El descenso de las poblaciones de conejos incide además de forma indirecta sobre las poblaciones de otras especies de herbívoros de ritmo reproductivo más lento como la liebre, la perdiz o la codorniz, que durante los últimos años han visto incrementada la presión por parte de depredadores y cazadores. Otro papel ecológico importante del conejo es su implicación en la regulación de la dinámica vegetal de su entorno natural y el de las numerosas especies que dependen de él. Desde el punto de vista cinegético, el conejo constituye la principal pieza de caza en España. La caza del conejo es practicada tradicionalmente por aproximadamente el 50% de los más de 1,5 millones de cazadores con licencia.

            Dos enfermedades víricas, la mixomatosis y la Enfermedad vírica hemorrágica del conejo (RHDV), están afectando de forma grave a las poblaciones de conejos. Existen vacunas comerciales que ofrecen buenos resultados en explotaciones de conejo doméstico (Argüello, 1986; 1991). Sin embargo, dichas vacunas resultan ineficaces en las poblaciones de conejo de monte, ya que requieren una administración individualizada mediante prácticas veterinarias convencionales (inoculación), lo que las convierte en inviables para su aplicación a la fauna silvestre. El interés de disponer de vacunas eficaces frente a ambas enfermedades, que permitan proteger a las poblaciones silvestres deriva de la importancia ecológica y cinegética que el conejo tiene en España.

Considerando todo lo anterior, en 1996 un convenio de la Federación Española de Caza y el Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaría (INIA) permitió iniciar un proyecto de investigación encaminado al desarrollo de una nueva estrategia para la inmunización simultánea de conejos silvestres frente a la mixomatosis y la RHD. La estrategia está basada en el desarrollo de una vacuna viva capaz de  transmitirse entre las poblaciones de conejos. Para ello se ha construido por ingeniería genética un virus recombinante mixoma-RHDV capaz de transmitirse horizontalmente entre conejos por contacto directo conejo-conejo o mediante vectores naturales como los mosquitos y las pulgas. La estrategia en esencia consistiría en la inoculación directa del virus recombinante a un pequeño número de conejos capturados, que posteriormente serían liberados y eventualmente transmitirían el virus vacunal a una fracción suficientemente grande de la población como para reducir la incidencia de la mixomatosis y la RHD.

            Este proyecto, que he tenido el placer de coordinar, ha sido desarrollado en su mayor parte en el Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) del Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaría (INIA), participando los siguientes investigadores: Juan María Torres, Rafael Blasco, Juan Bárcena, Miguel Angel Ramírez, Mónica Morales y Carmen Sánchez. Este proyecto ha contado además con la colaboración de otros investigadores externos al INIA como: Francisco Parra (Universidad de Oviedo), Javier Lucientes (Universidad de Zaragoza) y Albert Pagès (laboratorios HIPRA).

II. Fases del Proyecto

La realización de este proyecto se ha desarrollado en las siguientes fases:

II.1. Construcción del virus recombinante 6918VP60-T2

II. 2. Evaluación de la eficacia del virus recombinante 6918VP60-T2 para su utilización como vacuna

II.3. Protección transmisible inducida por la vacuna 6918VP60-T2.

II.4. Ensayos de seguridad de la vacuna.

II. 5. Evaluación de la vacuna en condiciones de campo.

II. 1. Construcción del virus recombinante 6918VP60-T2.

El primer paso en la preparación de la vacuna transmisible consistió en la selección de una cepa adecuada del virus mixoma para emplear como virus parental en la construcción del recombinante. El abordaje consistió en la realización de un amplio estudio de virulencia y difusión por contacto de una colección de  aislados de campo del virus mixoma obtenidos en diferentes zonas geográficas. La idea era que si se podía encontrar en la naturaleza un virus mixoma suficientemente atenuado, este debería tener capacidad de transmisión conejo a conejo, puesto que el virus estaba circulando en la naturaleza. Los resultados del estudio (Bárcena y cols. 2000a) permitieron seleccionar la cepa 6918, que presentaba ausencia de patología y capacidad limitada de transmisión por contacto conejo a conejo.

Una vez seleccionada la cepa 6918, se construyó el virus recombinante , denominado 6918VP60-T2, adaptando para ello procedimientos convencionales para la obtención de poxvirus recombinantes. El sistema se basa en la capacidad de los poxvirus de experimentar procesos de recombinación homóloga en el citoplasma de células infectadas. Básicamente, el método consiste en la inserción del gen exógeno de interés en la zona escogida del genoma del virus mixoma. Para ello se requiere como paso intermedio la construcción de un plásmido o vector de inserción que contenga el gen que se desea insertar, situado bajo el control de un promotor de poxvirus adecuado, y flanqueado por secuencias de DNA derivadas del genoma del virus mixoma, que dirigen la inserción del gen por recombinación homóloga en el lugar escogido del genoma viral. De este modo se insertó la secuencia del gen que codifica la proteína VP60 del virus RHDV (Bárcena y cols. 2000b). La VP60 es la proteína estructural mayoa del us. Se esco